国产vs进口,荧光定量PCR预混液真实测评
栏目:精品推荐 发布时间:2019-11-14
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2款国际大牌,3款国内品牌,共5款探针法荧光定量PCR预混液,扩增效率与特异性真实测评。

国产vs进口,荧光定量PCR预混液真实测评

2019-11-14 

2款国际大牌,3款国内品牌,共5款探针法荧光定量PCR预混液,扩增效率与特异性真实测评。


实时荧光定量PCR(real-time qPCR)实验在分子生物学研究中越来越普遍。现在常用两种荧光定量方法:SYBR Green I嵌合荧光染料法,和TaqMan探针法。染料法成本较低,使用方便,是最常用的荧光定量方法;探针法成本较高,但是定量结果更准确。



挑选一款质量好的扩增产品对于实验结果有至关重要的作用。新手们对于如何判断一款qPCR预混液的好坏有点迷茫,常常会出现一个误区:扩增效率越高越好。


 


为什么不是效率越高越好?产物的特异性怎么判断?国产品牌和进口品牌的差距在哪里?通过下面的实验就可以看出来。

测评开始

5种品牌的TaqMan探针法荧光定量PCR预混液,同时用相同的模板DNA和引物进行扩增。扩增曲线如下:
 





 
可以看出扩增曲线都正常,除了国产品牌C的Ct值较大,即扩增效率较低外,其余4个品牌的Ct值均接近。但是它们真实地反映了目标产物的实时扩增情况吗?
 


我们对以上qPCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,根据产物大小可以直观地判断其特异性:
 
 
品牌A和品牌D的产物存在明显的非特异性扩增;品牌C的产物大小不正确,完全是非特异性扩增;东盛生物(一款探针法和两款染料法)和品牌B的产物是特异的。
 


通过对比我们发现,扩增效率不是越高越好,产物特异才是最重要的!


 
首次使用的引物,不论是进行染料法定量的,还是探针法定量的,都建议通过DNA电泳来直观判断其特异性。当然,染料法定量的特异性也可以借助熔解曲线来判断。
 
以上只是我们对比测评的一组结果,综合多次、多品牌、多类型的对比结果,从整体水平来看,进口大牌的qPCR预混液比国产品牌质量更可靠,但也不是全部都表现很好。



东盛生物qPCR Mix不断优化升级,与众多国际品牌对比均表现突出。



东盛生物荧光定量PCR预混液核心成分为类抗体技术修饰的热启动酶,完美平衡了特异性与扩增效率。


特异性过高会抑制扩增效率,扩增效率过高会降低特异性,因此保持特异性和扩增效率在一个平衡的位置是qPCR Mix的技术难题。


东盛生物拥有超过十年的PCR技术研发经验,经过反复尝试,不断优化,得到了兼顾特异性与扩增效率的qPCR Mix。



部分客户发表文献如下:
Fengxia Tu, Qiongyi Pang, et, al. Angiogenic effects of apigenin on endothelial cells after hypoxia-reoxygenation via the caveolin-1 pathway. International Journal of Molecular Medicine. 2017; 40 (6): 1639-1648. DOI: 10.3892/ijmm.2017.3159.
Yaping Nie, Hu Chen, et, al. Palmdelphin promotes myoblast differentiation and muscle regeneration. Scientific Reports. 2017; 7 (1): 41608. DOI: 10.1038/srep41608.

 
广州东盛生物科技有限公司(Dongsheng Biotech Co., Ltd)成立于2005年1月,是一家专注于研发、生产、销售优质生命科学产品的高新技术企业。

公司产品线以PCR技术为核心,聚焦于普通PCR、qPCR、多重PCR,DNA电泳以及核酸纯化等分子生物学技术。产品主要应用于基础生命科学研究。

产品远销亚洲、欧洲和美洲等二十多个国家和地区,凭借优秀的产品质量和专业的技术支持,我们的产品获得了极佳的国际口碑。


 
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