2X One Step Prime RT-qPCR Mix
货号:V5007, V5008
产品组成
Component | V5007 (200 rxn, 25 μl/rxn) | V5008 (5000 rxn, 25 μl/rxn) |
2X One Step Prime RT-qPCR Mix * | 1.25 ml × 2 | 62.5 ml |
*包含逆转录酶,RNase抑制剂,热敏UDG酶,热启动DNA聚合酶,dNTPs包含dUTP,以及缓冲液组分。
保存条件
-15~-25℃
产品简介
2X One Step Prime RT-qPCR Mix 是用于一步法多重荧光定量PCR的试剂。它以探针和特异性引物来定量检测RNA或DNA靶标序列。优化的缓冲液组分可以协助在一个体系内完成多达4个RNA或DNA序列的多重定量PCR。该混合液以2倍浓度提供,能够加入更多的模板进行反应,从而提高检测的灵敏度。
应用举例
1. 准备反应体系
1.1 按下表配置反应体系。于冰上融化所有试剂。配制多个反应孔时,请为各组分预留10%的余量,以免移液损失。
1.2反应体系配好后,用光学贴膜覆盖反应板,充分翻转混匀,离心。
快速反应体系:
组分 | 体积 | 终浓度 |
2X One Step Prime RT-qPCR Mix | 12.5 μl | 1X |
引物-探针 | 1 μl | 引物:400-900 nM 探针:100-250 nM |
样品* | 根据需要调整 | 1 pg-100 ng |
RT-PCR级超纯水 | 根据需要调整 | – |
总体积 | 25 μl |
标准反应体系:
组分 | 体积 | 终浓度 |
2X One Step Prime RT-qPCR Mix | 25 μl | 1X |
引物-探针 | 2 μl | 引物:400-900 nM 探针:100-250 nM |
样品* | 根据需要调整 | 1 pg-100 ng |
RT-PCR级超纯水 | 根据需要调整 | – |
总体积 | 50 μl |
* DNA 或 RNA 样本均可,逆转录反应并不会对 DNA 样本造成影响。
2. 运行 RT-qPCR 反应程序
快速反应体系:
步骤 | 阶段 | 循环数 | 温度 | 时间 |
逆转录 | 1 | 1 | 55°C * | 10 min |
预变性 | 2 | 1 | 95°C | 2 min |
扩增 | 3 | 45 | 95°C | 5 sec |
60°C | 30 sec |
标准反应体系:
步骤 | 阶段 | 循环数 | 温度 | 时间 |
逆转录 | 1 | 1 | 55°C * | 10 min |
预变性 | 2 | 1 | 95°C | 2 min |
扩增 | 3 | 45 | 95°C | 15sec |
60°C | 60 sec |
* 逆转录反应的温度可以在 48℃至55℃之间进行调整。
3. 实验数据分析
针对不同的仪器类型,数据分析也略为不同。一般情况下,数据分析主要包括:
1.观察扩增曲线,根据需要进行设置,比如:
a.设置合适的基线和阈值线
b.将一些典型的异常值从分析中剔除掉
2.在孔位表或者结果表中,观察复孔之间的 Ct 值是否有差异;
3.对于绝对定量,观察标准曲线的斜率、扩增效率、R2值、截距、Ct 值和异常值。
本品仅供科学研究使用。
2 种形式可供选择
创新冻干粉形式,更易运输储存
传统溶液形式,使用更方便