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海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒(N1171-N1172-N1173)

促销: 485.00~1680.00
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N1171(50次) N1172(100次) N1173(200次)

海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒(硅胶膜离心柱法)产品组分

 

货号

N1171

50次)

N1172

100次)

N1173

200次)

消化缓冲液DS

15 ml

30ml

60 ml

裂解液MS

20 ml

40ml

80 ml

蛋白酶K

1 ml

2ml

4 ml

去蛋白液PS

30 ml

60ml

120 ml

漂洗液PE

15 ml

30ml

30 ml×2

纯化液TE

5 ml

10ml

20 ml

DNA纯化柱

 50

100

 200

说明书

1

1

1

 

裂解液MS中含变性剂,请不要直接接触皮肤。

漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

产品说明

本产品用于各种海洋动物组织(新鲜或冻存)样本的基因组DNA的纯化。已成功提取鱼类、虾类、贝类、蟹类等海洋动物组织基因组DNA。其纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆吸附基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从不超过10 mg组织材料中提取到3-35 μg 超纯基因组DNAOD260/OD280 = 1.7-1.9),此基因组DNA可直接用于PCR、酶切、文库构建等后续实验。

 

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷贝基因的PCR扩增鉴定。

 

保存条件

蛋白酶K室温运输,于-20℃保存,避免反复冻融。

其余试剂置于室温(15-25)干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DSMS中有沉淀,可在55加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

 

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

漂洗液PE第一次使用前请按瓶上标签加入3倍体积的无水乙醇,即15 ml漂洗液PE加入45 ml无水乙醇,30 ml漂洗液PE加入90 ml无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。

消化缓冲液DS和裂解液MS室温保存可能会有沉淀产生,在55加热溶解,待恢复至室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

应尽量使用新鲜的实验材料,确保提取的基因组DNA不被降解。不能立刻提取基因组DNA 的实验材料应尽快置于液氮或-80℃冰箱中保存,并避免反复冻融。

使用液氮研磨组织材料时,应随时加入液氮,确保提取的基因组DNA不被降解。

基因组DNA需长期保存时,建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20-80

所有离心步骤均为室温进行。

请严格按照操作步骤操作。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

取少量样本材料,放入液氮预冷的研钵中。快速用力研磨的同时加入少量液氮,直至样本材料被研磨成粉末。将研磨好的样本转移至1.5 ml离心管中,每管组织材料含量应不超过10 mg

如果没有液氮,尽快将组织切小置于离心管,进入下一步。

每支离心管中的样本当量不宜超过10 mg。每10 mg样本材料可获得10μg基因组DNA。样本量过大,将会影响细胞核裂解效率并可能堵塞纯化柱,进而降低基因组DNA的得率与纯度。

加入200 μl消化缓冲液DS,涡旋振荡15 s

    如需去除RNA,可加入4 μl RNase A100 mg/mlN9042),振荡混匀,室温放置5min

加入20 μl蛋白酶K,涡旋振荡混匀。55℃水浴或金属浴至溶液变清亮,通常需要1-3小时(期间可适当颠倒几次,温浴后简短离心以去除管盖内壁的水珠)。

加入220 μl裂解液MS充分颠倒混匀,65温浴10 min,简短离心以去除管盖内壁的水珠,室温放置5min使溶液冷却。

    加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀,一般65放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不纯。       

5    加入220 μl无水乙醇,上下颠倒混匀,此时可能出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠,将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中,12,000 rpm离心1min,弃滤液。

   若溶液体积大于纯化柱容积(700 μl),可分两次离心。

此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

加入500 μl去蛋白液PS12,000 rpm离心1min,弃滤液。

  此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质,以获得高质量基因组DNA

7  加入500μl漂洗液PE12,000 rpm离心1min,弃滤液。

  漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

加入500 μl漂洗液PE12,000 rpm离心1min,弃滤液。

9  12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

    此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

10  将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加30-100μl洗脱液TE,室温放置2min12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度基因组DNA-20保存。

    洗脱液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5

对洗脱液TE 65预热,会提高基因组DNA的产量。


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