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DNA凝胶回收试剂盒(N1071-N1072-N1073)

促销: 240.00~820.00
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N1071(50次) N1072(100次) N1073(200次)

DNA凝胶回收试剂盒

 

产品组分

 

货号

N1071

50次)

N1072

100次)

N1073

200次)

溶液BD

20 ml

40 ml

80 ml

溶液PE

15 ml

15 ml×2

20 ml×3

溶液Eluent

2.5 ml

5 ml

10 ml

DNA纯化柱

50

100

200

说明书

1

1

1


溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

溶液BD中含有变性剂,请不要直接接触皮肤。

上述产品组分均可单独购买,详见产品索引。

产品说明

本产品采用了经典的硅胶膜技术,用于从琼脂糖凝胶中回收DNA片段(50 bp-10 kb),也适合从PCR产物、酶促反应液中回收DNA,也可用于基因组DNA等样品的纯化。其纯化原理是含有目的片段的琼脂糖凝胶溶解后,硅胶膜柱高效可逆地吸附体系中的DNA片段(高盐、低pH值),蛋白及其它杂质不被吸附而被除去,被吸附的DNA片段在低盐、高pH值条件下再被洗脱纯化。一次可回收30μg高纯度DNA片段,此DNA片段可直接用于各种酶促反应等。

 

质量控制

1 % TAE琼脂糖凝胶中纯化50 bp1,000 bp10,000 bpDNA片段。

 

保存条件

室温保存2年。

 

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

溶液PE第一次使用前请按瓶上标签加入4倍体积的无水乙醇,即15 ml溶液PE中加入60 ml无水乙醇,20 ml溶液PE中加入80 ml无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。

本产品对电泳使用的琼脂糖种类没有严格限制。为了保证回收DNA的质量和回收效率,尽量使用高纯度的琼脂糖。

电泳时请使用新鲜配制的TAE电泳缓冲液,以免影响电泳及回收效果。TBE电泳缓冲液中的硼酸与琼脂糖相互作用生成的复合物会影响DNA的回收效率,因此TBE凝胶电泳不适合用于DNA回收。

请适当延长电泳时间,在条带分离清晰后进行切胶回收,以免回收到多余杂带。

为提高DNA回收收率,切胶时应尽量除去多余的胶块。

本试剂盒纯化柱的DNA吸附能力强。但如果DNA浓度小或DNA初始量少,回

收率将会偏低。

溶液Eluent10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA片段可直

接用于各种酶促反应等,不会影响后续试验。

为了保证回收效率,请不要使用未调整pH值的超纯水洗脱目的片段。

请严格按照操作步骤操作。


操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

切取含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶条带。

尽量切除不含有目的DNA部分的凝胶,减少凝胶体积,提高DNA回收率。

切胶时,请使用长波长UV360 nm)光盒。且不要将DNA长时间暴 露在紫外灯下,以防DNA损伤。

称取凝胶的重量,近似地确定其体积。

凝胶重量的称量方法:取1.5 ml2 ml离心管,用电子天平称其初质量,切胶装在离心管后称终质

量,两者差即为胶的质量。不同离心管的重量有差异,因此,每个离心管的重量需单独称量。

按照每100 mg琼脂糖凝胶对应100 µl溶液BD的比例,向离心管中加入溶液BD

4  55℃-65℃水浴7-10min,直至凝胶完全融化。期间需要颠倒混合3次。

琼脂糖必须完全融化,以免堵塞柱子,严重影响DNA片段的回收效率。

如果总体积大于500 µl,可适当增加溶胶时间。

若此时溶液变红,可加10 µl 3M NaAcpH 5.2)。

如要从反应液中回收DNA,则向反应液中加入等体积的BD,充分混匀,后续步骤相同:

将步骤4所获溶液置于DNA纯化柱中,静置2min

胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱,因为纯化柱在较高温度时结合DNA的能力     较弱。

●  如果所获溶液过多,超过DNA纯化柱容积(700 μl),可分次加入DNA纯化柱中。

6  12,000 rpm离心1min。若溶液体积大于DNA纯化柱的容积,可分两次离心,弃滤液。

此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

加入500 µl溶液PE12,000 rpm, 离心1min,弃滤液。

溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱,以获得高质量的DNA片段。

加入500 µl溶液PE12,000 rpm, 离心1min,弃滤液。

9  12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中的液体。

此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续酶促反应。同时也利于DNA片段的充分溶解。

10  将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中央处,悬空滴加30-100 µl溶液Eluent60℃预热),静置2min12,000 rpm 离心1min,管底即为目的DNA片段。贮存于-20℃

溶液Eluent可用无菌双蒸水代替,但其pH需为8.0-8.5,加入体积视DNA目的片段的多少、 用户对目的片段浓度要求而定。

对溶液Eluent 65℃预热,会提高提取DNA目的片段的产量。



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