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通用RNA提取试剂盒(离心柱型)(R1051)

价格: 650.00
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R1051(50次)

通用RNA提取试剂盒

产品组分

货号

R105150 次)

溶液 RL

60 ml

溶液 RPI

18 ml

溶液 RW

12 ml

DEPC处理水

10 ml

RNase-free 纯化柱

50

RNase-free 离心管

50

说明书

1

 

需要自备的溶液

  氯仿

  无水乙醇

 

产品说明

通用RNA提取试剂盒是经过改进开发的新一代产品,提高了裂解液的裂解能力和提取的灵敏度,通过在特定适宜的条件下特异、可逆地结合RNA,而各种蛋白质和其他杂质均可被去除掉,同时改进的硅基质膜增强了对RNA的吸附能力,得到的RNA纯度更好,质量更高。该试剂盒可从各种细胞或组织中快速提取总RNA,每个吸附柱每次可处理50–100 mg 组织或5×106 细胞,可同时处理大量不同样品,一个小时内即可完成反应。提取的总RNA没有DNA和蛋白的污染,可用于Northern blotDot blotpolyA 筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等。

 

保存条件

溶液RL应在2-8℃避光保存,其他溶液和纯化柱室温保存。

 

注意事项---------------------------------------------------------------------------------------------------------
  初次使用溶液RPI和溶液RW前,需按比例加入无水乙醇。18 ml溶液RPI中加入12 ml无水乙醇(3:2),12 ml溶液RW中加入48 ml无水乙醇(1:4)。

  严防操作环境、使用的容器、耗材和试剂的RNase污染。操作过程中勤换手套。

  使用本产品提取的RNA一般不含有DNA污染。在极少数情况下(与组织pH值等相关),如果有DNA污染而又必须去除,则可以用RNase-freeDNase处理样品。

  请严格遵照操作步骤操作。

  不同起始材料的用量及溶液RL的用量不同(参见下表),过多或过少的使用量都可能影响RNA的质量或产量。若起始材料量很少,RNA预计产量很低,在异丙醇沉淀时,可加入20mg/ml的肝糖原溶液0.5-1 μl促进RNA沉淀。

样品用量

溶液RL的用量

10cm2的贴壁培养细胞

1 ml

107的悬浮培养细胞

1-2 ml

100 μl的白细胞

2 ml

50-100 mg的普通组织样品

1 ml

50-100 mg的特殊组织样品(肝、脾、骨及软骨等)

2 ml

15-30 mg的植物材料(多糖和多酚含量不高的)

1 ml

  有关RNA的吸光度说明如下:

260nm320nm230nm280nm下的吸光度分别代表核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白质等有机物的污染程度,质量较好的RNAR值应在1.8-2.0之间,当R<1.8时,溶液中的蛋白质等有机物的污染比较明显;当>2.2时,说明RNA已经被水解成单核苷酸。

  RNA浓度=OD260-OD320*稀释倍数*0.04 μg/μl

操作步骤---------------------------------------------------------------------------------------------------------

第一次使用前应在溶液 RPI、溶液 RW中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。

1.  样品处理

组织:将组织在液氮中磨碎。每50–100 mg组织加1 ml溶液RL,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过溶液RL体积的十分之一。

单层培养细胞:直接在培养板中加入溶液RL裂解细胞,每10 cm2 面积加1 ml溶液RL。用取样器抽打几次。

 溶液RL的加入量根据培养瓶面积决定,不是由细胞数决定。如果加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染。

c.  细胞悬液:离心取细胞,弃上清。每5–10×106动物细胞和植物细胞加入1 ml溶液RL。加溶液RL前不要洗涤细胞,以免降解mRNA

2.  将匀浆样品在15–30℃放置5 min,使得核酸蛋白复合物完全分离。

3.  可选步骤:4℃ 12,000 rpm (~13,400×g) 离心5分钟,取上清,转入一个新的无RNase的离心管中。

 如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等,可加此步骤离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNARNA存在于上清溶液中。

(如样品含有较多多糖多酚,请增加以下步骤,在上清液中加入0.2×上清液体积的5 M NaCl1×上清液体积的酚/氯仿(1:1),混匀,12000 rpm 离心5-10 min ,取上清液加入等体积氯仿,混匀,12000 rpm 离心5-10 min,至第4步。)

4.  加入200 μl氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15 s,室温放置3 min

5.  4℃ 12,000 rpm离心10 min,样品会分成三层,从上至下依次是:无色的水相,白色的中间层和黄色的有机相,RNA主要存在于水相中,水相的体积约为所用溶液RL试剂的60%。把水相转移到新管中,进行下一步操作。注意不要吸到中间层。

 第一次使用前应在溶液 RPI、溶液RW中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。

6.  缓慢加入0.5 倍体积无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到溶液和沉淀一起转入纯化柱中,4℃ 12,000 rpm离心30 s4℃ 12,000 rpm离心30 s,弃掉收集管中的废液。
 若溶液体积大于纯化柱容积(700 μl),可分两次离心。

7.  向纯化柱中加入500 μl溶液RPI使用前请先检查是否已加入乙醇),4℃ 12,000 rpm离心30 s,弃废液。    

8.  向纯化柱中加入500 μl溶液RW使用前请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min 4℃ 12,000 rpm离心30 s,弃废液。

9.  向纯化柱中加入500 μl溶液RW,室温静置2分钟,4℃ 12,000 rpm离心30 s,去除残余液体。

10.  将纯化柱放入2ml收集管中,4℃ 12,000 rpm离心2 min,去除残余液体。

 此步骤的目的是将纯化柱中残余的漂洗液去除,离心后将纯化柱在室温放置片刻,或置于超净工作台上通风片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续的RT等实验操作。

11.  将纯化柱转入一个新的离心管中,加30–100 μl RNase-free ddH2O,室温放置2 min4℃ 12,000 rpm离心2 min

 洗脱缓冲液体积不应少于30 μl,体积过小影响回收效率。RNA应保存在-70℃-80℃),以防降解。

 如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次,合并两次得到的溶液。

 


 


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