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DH5α感受态细胞(C1041-C1042)

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C1041 C1042

DH5α感受态细胞

产品简介

本公司生产的DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108个转化子/μg质粒DNA-70℃保存3个月转化效率可保持在90%以上。每支感受态可以酌情分装使用,降低了实验的成本。质量稳定,使用方便,质优价廉。

基因型:F-φ80lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169 recA1endA1hsdR17(rk-mk+)phoAsupE44λ-thi-1gyrA96relA1

 

产品组分

货号

C1041

C1042

感受态细胞

5×100 μl

10×100 μl

对照质粒pUC191 ng/μl

10 μl

10 μl

说明书

1

1

 

产品特点

DH5α菌株一种常用于质粒克隆的菌株。其φ80lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。

 

保存条件

低温运输,-70℃冻存。

 

操作方法(以下操作均按无菌条件的标准进行)---------------------------------------------------------

1 取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化的细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。

一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

以下实验以100 μl感受态细胞为例。

2 向感受态细胞悬液中加入目的DNA,轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30分钟。

3 将离心管置于42℃水浴中放置90秒,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3分钟,该过程不要摇动离心管。

4 向每个离心管中加入500 μl无菌的SOCLB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床振荡培养1小时(160 - 220 /分钟),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

5 将离心管内容物混匀,吸取100 μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOBLB固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16小时。

涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA总量较少,可取 200-300 μl 转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板。)

 

注意事项----------------------------------------------------------------------------------------------------------

1. 感受态细胞应保存在-70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。

2. 进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。

3. 为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。


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