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FS Mix Direct for tissue(P2071b-P2072b)

促销: 200.00~880.00
运费 ¥0.00
P2071b(1ml(40次,50ul体系/次)) P2072b(1ml*5(200次,50ul体系/次))

FS™ Mix Direct for Tissue

Cat. #P2071bP2072b

产品简介

FS™ Mix Direct for Tissue是适合组织样本扩增的浓缩快速高效PCR预混合溶液,含有FS™ Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增体系中加入简单处理后的样本处理液和引物即可进行PCR,从而可以极大地简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)。FS™ Mix Direct for Tissue的反应体系经过优化处理,高灵敏度的FS™ Taq DNA聚合酶确保处理液中的微量样本得到高效扩增。本产品不用进行繁琐的DNA提取,最大限度减少实验误差和交叉污染;同时依靠特殊的缓冲体系增强PCR扩增的特异性,保证扩增效果与DNA模板扩增效果同样可靠。

FS™ Taq DNA聚合酶是根据蛋白工程原理,以Taq DNA聚合酶为基础,研发设计的新一代DNA聚合酶。本产品具有类似KOD酶的快速扩增能力,延伸速度为20s/kb70~75℃,简单模板可达5s/kb)。是普通Taq DNA聚合酶的3倍,可缩短一半以上的扩增时间;同时具备Taq DNA聚合酶扩增效率高、适应性广等优点。FS™ Taq DNA聚合酶使用方法与普通Taq DNA聚合酶基本相同,只需注意适当缩短延伸时间。该酶具有5'→3'聚合酶活性,无3'→5'外切酶活性。扩增产物具有3'-dA突出端,可直接用于TA克隆

产品组成

Component

P2071b

P2072b

2× FS™ Mix   Direct for Tissue

1 ml

1 ml× 5

超纯水

1 ml

1 ml× 5

Neutralization    Solution  

1 ml

5 ml

Extraction    Solution    

10   ml

40   ml

本产品分体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如无特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

保存条件

-20℃保存2年。

质量控制

纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能检测:PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

应用举例

1. 处理样品

组织:3-5mg组织置于1.5ml离心管中,加入180 μl Extraction Solution,充分涡旋振荡,95℃温浴10min。加入20 μl Neutralization Solution,充分涡旋振荡,5,000rpm离心2min,取0.5-2 μl上清进行扩增。

头发:取两根带毛囊的头发,剪下带毛囊的发根放入1.5ml离心管中,加入180 μl Extraction Solution,充分涡旋振荡,95℃温浴10min。加入20 μl Neutralization Solution,充分涡旋振荡,5000rpm离心2min,取0.5-2 μl上清进行扩增。

口腔拭子:取样前30min内请勿进食及饮水,使用无菌棉签在口腔内擦拭10次。将棉球剪下置于1.5ml离心管中,加入180 μl Extraction  Solution,充分涡旋振荡,95℃温浴10min。加入20 μl Neutralization Solution,充分涡旋振荡,5,000rpm离心2min,取0.5-2 μl上清进行扩增。

培养细胞:如果是悬浮培养细胞直接取1×103-104当量的细胞加入到50 μl PCR反应体系中即可。如果是贴壁培养细胞,取3-5mg细胞组织置于1.5ml离心管中,加入180 μl Extraction Solution,充分涡旋振荡,95℃温浴10min。加入20 μl Neutralization Solution,充分涡旋振荡,5,000rpm离心2min,取0.5-2 μl上清进行扩增。

血液、淋巴液DNA病毒:100 μl血清或淋巴液至1.5ml离心管中,加入180 μl Extraction Solution,充分涡旋振荡,95℃温浴10min。加入20 μl Neutralization  Solution,充分涡旋振荡,12,000rpm离心10min,取0.5-2 μl上清进行扩增。

2. 配制反应体系

请于冰上配置反应体系,体系大小与组分用量与添加顺序可调整:

Ordinal

Component

Volume

(50 μl reaction volume)

Final   concentration

(50 μl reaction volume)

1

2× FS™ Mix   Direct for Tissue

25   μl

2

upstream   primer (10 μM)[1]

2 μl

0.4   μM

3

downstream   primer (10 μM)[1]

2 μl

0.4   μM

4

处理液上清

0.5-2   μl

<1μg

5

超纯水[2]

To 50   μl

-

optional

MgCl2(MgSO4)/PCR   Enhancer[3]

Variable

-

[1] 引物终浓度建议范围:0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度,效率低时可提高浓度。

[2] 可单独订购超纯水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

[3] 可单独订购25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

3. 设定反应程序进行PCR反应

大多数模板的快速扩增条件:

Stage  

Temperature

Time

Number   of Cycles

Initial   Denaturation

94℃

3   min

1

Denaturation

94℃

30   sec

28-40  

Annealing

55-68℃[1]

30   sec

Extension

72℃

Variable[2]

Final   Extension

72℃

2   min

1

[1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。

[2] 延伸时间按20 sec/kb来设最佳。

1kb简单模板的快速扩增条件:

由于1kb简单模板的二级结构简单,且长度较短,可同时缩短变性、退火时间至15s,延伸时间20s,以实现快速扩增。

4. 分析结果

反应产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要,可进行割胶回收。无产物或产物量少的改进措施有:1调整退火温度;2减少抑制剂的影响,如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分,需要高倍稀释(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脱,提高模板DNA的纯度;4使用PCR添加剂,如PCR EnhancerCat. #P9041MgCl2Cat. #P9031等可提高产量。

操作注意事项

处理的组织样本往往不会完全溶解,这是正常现象。溶解在处理液中的组织样本足够满足FS™ Mix Direct for Tissue扩增的需要。

室温下FS™ Taq DNA聚合酶有一定的活性,为避免发生非特异性扩增,请于冰上配置反应体系,并且最后添加模板DNA

延伸时间视片段长度而定。一般情况,≤500bp目的片段延伸15s500bp-1kb延伸20s,>1kb延伸时间按20s/kb计算。

FS™ Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3’末端通常会加上一个多余的脱氧腺嘌呤核苷,可进行TA克隆。

FS™ Mix Direct for Tissue也可采用常规程序扩增。

引物设计注意事项

引物长度一般在15-30个碱基之间;上下游引物3’末端避免互补,避免出现3个以上重复的GC,或出现发夹结构,否则会产生非特异性扩增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量尽量接近;Tm值控制在55-65℃之间,且上下游引物Tm值尽量接近,额外附加序列(酶切位点、修饰等)是非模板匹配序列,不参与Tm值计算。

相关产品

名称

货号

规格

PCR Mix

P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

Power Green qPCR Mix

P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

1kb ladder

M1181/M1182

50/250

DSTM5000

M1111/M1112

60/300

高纯度质粒小提试剂盒

N1011/N1012/N1013

50/100/200

通用RNA提取试剂盒

R1051

50

基因组DNA快速提取试剂盒

N1111/N1112

50/100

DNA凝胶回收试剂盒

N1071/N1072/N1073

50/100/200

RT-PCR Kit

R1011/R1012

20/100

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