Gold逆转录酶

货号/规格：R3001/2,000U, R3002/10,000U

产品简介

Gold逆转录酶是通过基因重组技术改造M-MLV得到的耐热逆转录酶，具有更高的热稳定性，可在 37℃-55℃条件下合成第一链cDNA。同时该酶去除了RNaseH 活性，对于常见的逆转录反应抑制剂具有较高的耐受度，cDNA合成能力更强，可用于复杂二级结构的RNA逆转录，能够合成较长的cDNA 以及构建高比例的全长cDNA文库等。

产品组成

活性定义

以Poly (rA)·Oligo (dT)为模板/引物，在37℃，10 min条件下，使1 nmol的dTTP掺入酸性沉淀物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

保存条件

-30~-15℃保存。

应用举例

第一链cDNA合成

1. 配制反应体系

按以下体系于RNase-free的离心管中配制逆转录反应液： 

[1] 请根据实验需要选择合适的引物：Oligo dT引物仅转录mRNA，Random Primer可转录所有类型的RNA，特异性引物仅转录特异的RNA片段。当后续实验为qPCR时，建议混合使用Oligo dT和Random Primer各1 μl，提高定量结果的准确性。

[2] 若产物后续进行PCR反应，则建议先对模板RNA进行变性处理打开二级结构，有助于提高逆转录产物的产量。配置以下反应体系，于65℃加热5 min，再置于冰上迅速冷却2 min：

2. 设定程序进行逆转录反应

将上述混合物充分混匀后按以下条件进行逆转录反应：

[1] 仅当使用Random Primer时需要此步，当使用Oligo (dT)₁₅ Primer或特异性引物时无需进行此步。

[2] 当模板RNA具有复杂的二级结构或者高GC含量时，可将温度提高至50℃。

产物可立即进行PCR、qPCR反应，或保存于-20℃及以下环境中，并避免反复冻融。

注意事项

1. 请使用高质量的RNA，保证逆转录反应的效率

2. 在逆转录反应中注意防止RNase污染

本品仅供科学研究使用。